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    文獻分享-SERS聯合免疫分析同步測定血清中IgG1和IgG3兩種免疫球蛋白亞型的水平

    發布日期:2023-09-19    

    一、研究背景

    免疫球蛋白(Immunoglubin, Ig),主要存在於血漿中,是指具有抗體活性的動物蛋白,可根據重鏈和抗原性的不同分為IgA、IgD、IgE、IgG、IgM。其中IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白,也是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白[2],在機體免疫中發揮免疫調節、抗感染及細胞毒等作用。IgG分為4個亞類,分別是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,它們的空間結構相似,但二硫鍵的位置和數目不同,血清濃度差異較大,在免疫調節中也發揮著不同的作用[3]。一般病毒感染和Rh血型係統引起的新生兒溶血病均會導致IgG1IgG3的水平變化[4],監測患兒血漿IgG1、IgG3抗體的變化對新生兒溶血病的輔助診斷有一定的價值[5]。此外,IgG1IgG3水平已被證明與瘧疾免疫調節及兒童炎症性多係統綜合征有關[6]。

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    目前常用的 IgG 亞型的定量檢測方法有放射免疫擴散法(RID)、酶聯免疫法(ELISA)、免疫散射比濁法。RID是最早用於IgG亞型定量檢測的方法,需要大量抗血清,測試時間長且靈敏度較低;ELISA 方法可定性、定量檢測 IgG 亞型,成本較低,但是 IgG 各亞型隻能單獨測定,無法聯合檢測;目前多采用免疫散射比濁法,自動化程度高,重複性好,但也需單獨測定IgG各亞型。本研究基於表麵增強拉曼光譜法(Surface enhanced raman scattering, SERS)結合免疫分析及磁分離技術,同時測定血清中IgG1IgG3亞型水平。

    二、測試樣品及實驗儀器搭建

    本文采用上海蜜桃免费观看光電生產的SEED3000 型拉曼蜜桃免费视频進行數據采集,通過蜜桃免费观看Uspectral-PLUS軟件進行光譜預處理。

    三、實驗結果

    3.1 抗體的偶聯及拉曼微球免疫探針拉曼光譜的測定

    分別對2種拉曼微球進行標記檢測抗體,標記後使用蜜桃免费观看SEED3000拉曼蜜桃免费视频對2種拉曼微球免疫探針進行掃描,結果顯示,2種拉曼微球標記檢測抗體後,特征拉曼峰未發生變化,用於定量的特征峰不受其他峰幹擾,表明這2種拉曼微球免疫探針可用於同一反應體係中不同物質的檢測,測試結果見圖2。

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    3.2 IgG1IgG3含量的測定

    分別取IgG1IgG3抗原標準物質,混合,用含 2% BSA PBS 溶液稀釋,配製成IgG1濃度分別為 75、150、300、500、1500 ng/mL,IgG3濃度分別為 4.4、8.8、17.7、29.6、88.7 ng/mL 的係列標準溶液。

    結果顯示,在待測樣品溶液中,拉曼微球 1-IgG1 抗體、拉曼微球 3-IgG3 抗體、Biotin-IgG 抗體分別與 IgG1 待測抗原和IgG3 待測抗原特異性結合形成雙抗夾心複合物,混合溶液未改變拉曼微球的特征拉曼峰,表明該雙抗夾心複合物較穩定,可用於 IgG1 IgG3 亞型的定性檢測,混合液測試結果見圖3。

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    IgG1 濃度在75~1 500 ng/mL、IgG3 濃度在 4.4~88.7 ng/mL 範圍內與拉曼信號響應值呈良好的相關性,見圖4。


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    3.3 特異性實驗

    血清中4IgG亞型水平的變化常與感染有關,因此考察炎症因子降鈣素原(PCT)、白介素 6IL-6)及試驗中所用封閉劑牛血清白蛋白(BSA)對 IgG1 IgG3 檢測的影響。結果表明,表明同時檢測 IgG1、IgG3 時,20 ng/mL PCT、1 ng/mLIL-6 10% BSA均不影響測定結果,該方法具有良好的特異性,測試結果見圖5。

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    3.4 臨床樣品測定及對比實驗

    25 IgG 臨床樣本,分別采用散射比濁法定值SERS法進行檢測,檢測結果采用SPSS 22.0軟件對這兩種方法的測定結果進行 t 檢驗分析,驗證本方法的準確性。結果顯示,IgG1 測定結果 t 檢驗分析得出 t=-1.073,P=0.294>0.05,表明兩種方法測得的結果無統計學差異,相關係數 r=0.9631,表明兩種方法相關性良好;IgG3 測定結果 t檢驗分析得出t=-0.129,P=0.898>0.05,表明兩種方法測得的結果無統計學差異,相關係數r=0.9517,表明兩種方法相關性良好,結果見圖6。


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    四、實驗結論

    結果表明,可通過蜜桃免费观看光電SEED3000拉曼蜜桃免费视频與SERS技術結合聯合免疫分析法同步測定血清中IgG1和IgG3兩種免疫球蛋白亞型的水平。

    五、文獻來源

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    參考文獻

    [1] 宋百靈,王磊,趙慧雪,等.SERS聯合免疫分析同步測定血清中IgG1和IgG3兩種免疫球蛋白亞型的水平[J].新疆醫科大學學報, 2022, 45(7):764-769.

    [2]範列英.關注免疫球蛋白IgG亞類檢測的臨床應用[J].中華檢驗醫學雜誌,2020,43(9):870-873.

    [3] LEE H Y, KOVACS C, MATTMAN A, et al. The impact of IgG sub-class deficiency on the risk of mortality in hospitalized patients with COPD[J]. Respiratory Res,2022,23(1):141-145.

    [4] 龐新豐,喬靜,範貞,等. 新生兒溶血病與母體血型抗體IgG免疫球蛋白分型相關性分析[J]. 中國優生與遺傳雜誌,2020,28(12):1489-1490.

    [5] 楊勁,儲節華,曹明鵬,等. ABO新生兒溶血患兒血漿遊離及紅細胞放散抗體 IgG 亞型與溶血程度的相關性分析[J]. 中國輸血雜誌,2021,34(6):624-627.

    [6] PEREZ T M, FAUSTINI S E, JOSSI S E, et al. SARS-CoV-2-specific IgG1/IgG3 but not IgM in children with Pediatric Inflammatory Multi-System Syndrome[J]. PAI, 2021,32(5):1125-1129.

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    2、產品特點

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    ◆ 可適配光譜範圍在200cm-1~3000cm-1;

    ◆ 高穩定性,光譜響應穩定性<2% @2hrs;

    ◆ 高分辨率,分辨率最佳可達4cm-1。


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